重组人I型α聚集金黄色葡萄球菌表现出凝集素样功能

1。介绍

金黄色葡萄球菌继续对人体健康造成挑战

通过获得新的遗传元素和免疫系统来逃避免疫系统的能力

抗抗生素发展[ 1 ]。因此，随着发展新

传统药物的兴趣和健康的好处看替代

战略管理的金黄色葡萄球菌感染，可以更好地使用协同

现有抗生素。

C型凝集素超家族在免疫系统中的作用是有据可查的

[ 2 ]。血清甘露糖结合蛋白（MBP）是典型的钙依赖性碳水化合物

MBL和ficolins激活补体凝集素途径后

对感染微生物细胞表面的碳水化合物结合，其次是opsohow

引用本文：贾马尔，N.，Kezuka，

Y.，野，T、Ohashi、K.、椰果、K.

（2017）重组人I型α聚集

金黄色葡萄球菌

凝集素样功能。生命科学进展

和生物技术，8，79-90。

https://doi.org/10.4236/abb.2017.83006

收稿日期：2017年2月13日

接受：2017年3月13日

发布时间：2017年3月16日

2017作者和版权©

科学研究出版公司

这项工作是根据创意许可

署名国际

许可证（CC 4）。

http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

开放存取

N. Jamal等。

八十

化和吞噬作用[ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] [ 6 ]。免疫表面凝集素受体

细胞通过微生物表面的糖链识别结合病原体[ 7 ] [ 8 ]

[ 9 ]。C型凝集素受体启动信号通路导致内吞作用，

炎症细胞因子的吞噬和生产[ 10 ]。

Reg蛋白成员REG（regenerating gene）基因家族[ 11 ]

[ 12 ] [ 13 ]，被归类为C型凝集素，表现出碳水化合物特异性通过

C型凝集素样结构域（CTLD）[ 14 ]。类III Reg家族蛋白显示抗菌

对鼠伤寒沙门氏菌活性，Yersinia pseudituberculosis，

枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、英诺克李斯特氏菌和L. monocytogens

[ 15 ] - [ 20 ]由于他们的能力结合到细菌细胞上显示的分子

表面[ 15 ] [ 16 ] [ 20 ] [ 21 ]。注册蛋白，不像传统的C型凝集素，

是相对较小的单体蛋白质，虽然不识别单糖

[ 22 ] [ 23 ] [ 24 ]，他们明显与双糖[ 24 ]，多糖

[ 15 ] [ 21 ] [ 24 ]和脂类[ 16 ] [ 17 ]。

第一类蛋白质被确定为胰岛β细胞再生因

[ 25 ]其中人类I型α是一个16 kDa的分泌蛋白主要表

胰腺组织中低表达的胃黏膜及微量元素水平

肾[ 26 ]。据报道，Iα刺激胰腺β细胞增

NOD小鼠的体外和改善糖尿病[ 27 ] [ 28 ]。

氨基酸序列和结构分析显示C型凝集素样结构域

在人类注册表Iα[ 29 ] [ 30 ]。Iovanna，et al。（1993）先前已检测

人Iα刺激人粪便中细菌的聚

类杆菌、真杆菌、Escherichia coli（KH—802），Peptostreptococcus

双歧杆菌[ 22 ]。然而，Iα对病原菌的抗菌活

迄今为止还没有调查细菌。在本研究中，我们有

分析了人I型α对细胞表面多糖的凝集素样特

革兰氏阳性金黄色葡萄球菌。为了我们的目的，我们表达重组

人在大肠杆菌中的I型α并从包涵体中纯化基因产

在阴离子交换色谱柱上使用纯化的蛋白质

金黄色葡萄球菌凝集刺激分析。

2。材料与方法

2.1。细菌菌株

金黄色葡萄球菌209P（ATCC 6538P）菌株进行研究。

2.2。表达系统

用成熟PCR扩增成熟肽的人Iα基

引物5’gttgatttgcctcttaagcaag-3感[的]和反义引物

[ 5 - aattgctggatcagttctagac-3 ]克隆到pbluscriptsk−T

序列确认向量。确定的基因序列进行了介绍

为表达载体pTriEx-4（操作），SmaI和XhoI之间的内

多重克隆位点。pTriEx-4包括基因序列的15个氨基酸长

管是克隆目标基因的N端。在我们的学习中，我们

从载体中删除这个序列，通过反向PCR使用感测引物

N. Jamal等。

八十一

5'caagaggcccagacagagttgccccag-3和反义引物5’—

gtgatggtggtgatggtgtgccatggt-3 '，因此我们的成品呢

没有任何管末端。该管删除质粒转化

在大肠杆菌Rosetta（DE3）主办，2（操作）。2.3。Iα的表达与复

两毫升预培养重组Rosetta 2在Luria过夜孵育

肉汤（LB）在37˚C中存在的50μμg／ml和34 Ampicillinμ克/毫升氯霉素

25毫升LB与新鲜抗生素接种预培养

次日，进一步培养37˚C到A600达到0.80。文化是

在室温下冷却30分钟，在蛋白表达被诱导之前

在25˚C 4小时isopropyl-1-thio -β在终浓度