双黄消炎片中盐酸小檗碱含量测定

 双黄消炎片由三颗针、黄芩2味中药组成,用于咽喉痛、腹泻、痢疾、慢性痢疾的治疗。原标准收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第2册,质控方法简单,不足以控制其质量。为确保临床用药安全,保证药品的质量,本试验采用高效液相色谱法(HPLC)测定方中主药三颗针中盐酸小檗碱的含量。

　　1  仪器与试药   学术论文发表

    日本岛津LC-10AT2010自动进样高效液相色谱仪；Sartorius-BT214D电子分析天平；JJ200电子分析天平；中性氧化铝柱(200～300目,4 g,内径1～1.5 cm)。盐酸小檗碱标准品(中国药品生物制品检定所,批号110713-200208)；双黄消炎片(诺氏制药有限公司提供,批号20051205、20051209、20060204,吉林省俊宏药业有限公司,批号20040301、20040302、20040801)。甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水(经0.45 μm水膜滤过)；其他试剂均为分析纯。
 
　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件

    色谱柱：Diamonnsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾(35∶65,用磷酸调节pH值至3.0)；检测波长为345 nm；柱温：30 ℃；理论板数不低于4 000。进样量：对照品和供试品均为10 μL[1]。

　　2.2  溶液的制备

    对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液,即得。

    供试品溶液的制备：取重量差异项下的本品,精密称定,研细,取约0.5 g,精密称定,置锥形瓶中,精密加入盐酸-甲醇(1∶100)25 mL,称定重量,加热回流提取30 min,放冷,再称定重量,用盐酸-甲醇(1∶100)补足减失的重量,滤过,精密吸取滤液5 mL,加于中性氧化铝柱(200～300目,4 g,内径1～1.5 cm)上,用乙醇40 mL洗脱,收集洗脱液于50 mL容量瓶中,加乙醇至刻度,摇匀,即得。

    阴性对照溶液的制备：取不含三颗针的阴性对照样品,按供试品溶液制备方法制得。

　　2.3  线性关系考察学术论文发表

    分别精密吸取对照品溶液(0.020 36 mg/mL)2、6、10、14、18、22 μL,依次注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定。以进样量为横坐标,盐酸小檗碱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为：Y＝4×106X＋83.724,r＝1。结果表明,盐酸小檗碱在0.040 7～0.447 9 μg范围呈良好线性关系。
2.4  系统适用性试验
   
　　分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL,在上述色谱条件下进行测定,得样品、对照品、阴性样品色谱图,见图1。

　　2.5  精密度试验

    精密吸取同一供试品溶液10 μL,连续进样6次,测定盐酸小檗碱峰面积积分值的平均值为1 228 183.8,RSD＝1.1%。结果表明,本方法精密度良好。

　　2.6  重复性试验

    取同一批号(20040801,吉林省俊宏药业有限公司)样品6份,分别按供试品溶液制备方法制成样品溶液,分别测定盐酸小檗碱含量。测得平均含量为3.54 mg/片,RSD＝0.6%。结果表明,方法重复性良好。

　　2.7  稳定性试验

    取同一供试品溶液,依法分别于0、2、5、8、10 h测定盐酸小檗碱峰面积积分值,平均为746 260.2,RSD＝0.5%。表明本品溶液在10 h内稳定。

　　2.8  加样回收率试验
   
　　称取已知含量的样品约0.25 g,精密称定。精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(0.152 8 mg/mL)25.0 mL,依法测定,结果见表1。测得盐酸小檗碱的平均回收率为97.88%,RSD＝0.7%。表明本法回收率较好,准确度较高。 表1  加样回收率试验结果（略）学术论文发表

　　2.9  样品测定

    依正文方法测定9批样品,测定结果表明,双黄消炎片的含量每一厂家基本稳定,考虑到大生产过程中可能会有波动,故规定每片含盐酸小檗碱以C20H18CINO4计,不得少于3.5 mg。见表2。表2  双黄消炎片中盐酸小檗碱含量测定结果（略）

　　3  讨论

    检测波长的选择,取盐酸小檗碱的甲醇溶液,于200～400 nm进行扫描,选择其最大波长345 nm作为测定波长。

    本试验曾先后以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾(35∶65,用磷酸调节pH值至3.0)、甲醇-水(35∶65)为流动相系统,并进行了优化试验,结果乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾(35∶65,用磷酸调节pH值至3.0)流动相系统分离效果最佳,保留时间适度。因此,确定其为本法的流动相。

【参考文献】
  [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.591.