HPLC法测定消妇炎胶囊中没食子酸的含量

【摘要】目的 建立高效液相色谱法测定消妇炎胶囊中主要成分没食子酸的含量。方法  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.04%磷酸溶液（4：96）作为流动相；检测波长为274nm，理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000。结果  没食子酸检测浓度线性范围为0.031～0.248μg（r=0.9999）；回收率为98.15%,RSD=1.1%(n=6)。结论  本方法灵敏、准确、专属性强，可用于消妇炎胶囊中主要成分没食子酸含量的测定。
【关键词】HPLC  消妇炎胶囊  没食子酸  医学职称论文发表 医学论文发表网 医药论文发表 医学论文发表网站 医学论文发表期刊
        消妇炎胶囊处方来源于贵州省少数民族民间验方。处方由头花蓼、地稔、黄柏、延胡索、当归、五指毛桃、益母草七味药组成，具有清热解毒，除湿止带，行气止痛的功效，民间用于妇女带下等症[1]。本品中主药地稔和头花蓼均含有没食子酸，现代研究表明，没食子酸具有收敛、抗炎的药理作用，因此，它是地稔和头花蓼的有效成分，本文采用高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定了没食子酸的含量。
        1  仪器与试药  
        高效液相色谱仪：SeriesⅢ泵(美国)， Mode500紫外检测器(美国)；TG332A（十万分之一）天平（上海）。
        没食子酸标准品（中检所，批号：110831-200302）。消妇炎胶囊三批（批号：20080801、20080802、20080803）。甲醇（色谱纯，天津大茂）；磷酸（分析纯，天津大茂）；水（重蒸馏，临用前制备）。
        2  方法与结果
        2.1　色谱条件  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-0.04%磷酸溶液（4：96）作为流动相；检测波长为274nm，理论板数按没食子酸峰计算应不低于3000。
        2.2　系统适用性试验  分别取没食子酸对照品溶液、供试品溶液及缺地稔和头花蓼的双阴性对照溶液各10µl注入液相色谱仪，记录色谱。从图谱可知，在此色谱条件下，没食子酸峰与其他组分峰分离完全，在与没食子酸峰相同的保留时间处，阴性对照无干扰（如图1、2、3）。
        
        图1：没食子酸对照品
        
        图2：供试品溶液   
        
        图3：双阴性对照溶液
        2.3 供试品溶液的制备  
        取装量差异项下本品内容物0.4g，精密称定，精密加入50%甲醇50ml，称定重量，超声处理45分钟，取出，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，即得。
        2.4 线性关系考察  精密称取没食子酸对照品15.50mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得0.0124mg/ml的没食子酸对照品溶液，分别精密吸取没食子酸对照品溶液2.5μl、5μl、10μl、15μl、20μl，注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面积积分值，测定结果见表5-23，并以对照品进样量X（μg）为横坐标，峰面积值Y(mv.s)为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，没食子酸在0.031～0.248μg范围内线性关系良好。
        2.5 精密度试验  精密吸取对照品溶液10µl（浓度为0.0124mg/ml），重复进样6次，测定没食子酸峰面积积分值，求出峰面积平均值为211024，RSD=0.61%,结果表明精密度良好。
        2.6 稳定性试验  取一供试品（批号：20080801），按2.3项供试品溶液的制备方法制备供试液。在室温下每隔一段时间进样10µl，测定没食子酸峰面积值，求出峰面积平均值为189691, RSD=0.43%,结果表明，没食子酸在12小时内基本稳定。
        2.7 重复性试验   精密取本品（批号：20080801）各0.4g，共6份，照前述供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液。精密吸取供试品溶液各10µl，测定没食子酸峰面积积分值，计算平均含量为1.248（mg/g），RSD=1.04%，结果表明，重复性良好。 2.8　中间精密度   取同一批样品（批号：20080801），分两组由不同操作人员在不同设备(A组: LC-2010A高效液相色谱仪；B组：SSI高效液相色谱仪)上对本品进行含量测定，两组结果平均值为1.20 mg/g,结果表明，中间精密度良好（RSD=0.16%）。
        2.9　回收率试验   采用加样回收法试验，取已知含量的同一批样品（批号：20080801）6份，精密称取各约0.25g，精密加入没食子酸对照品适量，按供试品溶液制备方法制备成供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10µl，照上述色谱条件测定，记录色谱图，计算含量，结果表明，没食子酸的回收率良好，结果见表1。
        表1  加样回收试验结果
        
        2.10  样品测定  取3批中试样品(20080801、20080802、20080803)按2.3项下方法制备供试品溶液, 精密吸取20μl进样分析,记录色谱图；另按2.2项下方法制备对照品溶液,同法测定，按外标法以峰面积计算供试品的含量，结果见表2。按下式计算含量：   
   
        
        3  讨论
        3.1  供试品溶液制备中提取方法选择
        方法1：取本品内容物，置回流瓶中，以4mol/L盐酸溶液为提取溶剂，以回流提取为处理方法，考察了不同提取时间内容物没食子酸含量。结果见表3。
        
        试验结果表明，本品采用50%甲醇超声提取效率高、耗时短、操作简便，且供试品溶液不含酸，能有效保护色谱柱，可采用其为本品供试品处理方法，根据不同提取时间考察结果，确定超声时间为45分钟。
        3.2 供试品溶液制备中提取溶剂比较
        取本品内容物，分别以水、甲醇和乙醇50ml，超声提取30分钟，过滤，滤液经微孔滤膜过滤，作为供试品溶液，测定没食子酸含量，结果溶剂水和甲醇的提取效率相当，而乙醇的提取效率较低，由于以水为溶剂制备的供试品较以甲醇为溶剂制备的供试品颜色深，考虑到对色谱柱的保护，我们选择甲醇为样品提取溶剂，结果见表5。
        表5  提取溶剂考察结果
        
        试验结果表明，本品还是采用50%甲醇作为提取溶剂较为合适。
参 考 文 献
[1] 邱洪,张永萍,王利平,等.消妇炎胶囊提取工艺合理性实验研究[J].中国药业,2009,18(19):14