参白浓缩丸质量标准的建立

参白浓缩丸是以临床有效复方参白汤为基础研制开发的中药制剂,由黄芪、丹参、赤芍、白茅根、人参等中药组成,用于治疗病毒性心肌炎以及由病毒性心肌炎引起的心律失常等后遗症。自1984年以来,临床观察参白汤的总有效率可达97%以上[1-2]。药理实验表明,该制剂能有效对抗氯化钡和乌头碱诱发的大鼠心律失常现象,对慢性心力衰竭大鼠的心功能具有明显的改善作用。为了保证参白浓缩丸的质量可控、稳定,本研究参考2005年版《中华人民共和国药典》方法[3],采用TLC法对制剂中的黄芪、赤芍和白茅根进行了定性鉴别,采用HPLC法测定了主要有效成分丹酚酸B的含量,为参白浓缩丸质量标准的建立提供依据。

　　1  仪器与试药    职称论文发表网

    岛津LC-2010高效液相色谱仪,紫外检测器,CLASS-VP色谱工作站；UV-1型三用紫外分析仪,B3200S-T型超声仪(必能信超声上海仪器有限公司)。硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂)。
   
　　对照品黄芪甲苷(批号110781-200512)、芍药苷(批号110736-200316)、丹酚酸B(批号111562-200304),对照药材黄、芪、赤芍、白茅根,均购于中国药品生物制品检定所；参白浓缩丸(自制,批号080301、080302、080303、080304、080305)。

　　2  薄层色谱鉴别

　　2.1  黄芪

    取参白浓缩丸2 g,研细,加甲醇40 mL超声提取,滤过,滤液回收甲醇并浓缩至干。残渣加水10 mL,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次30 mL,合并正丁醇提取液,用氨试液提取2次,每次5 mL,弃去氨水层,再加20 mL正丁醇饱和水洗1次,取正丁醇层,回收溶剂,残渣加2 mL甲醇溶解,得供试品溶液。另取黄芪对照药材用同法制成对照药材溶液。再用同法制成缺黄芪的阴性对照液。分别吸取上述3种溶液及黄芪甲苷对照品溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)的下层液作展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105 ℃加热至斑点清晰。供试品色谱中,在与黄芪甲苷对照品及对照药材色谱相应的位置上,日光下显相同的棕褐色斑点,紫外灯(365 nm)下显相同的橙黄色斑点。黄芪阴性对照液无上述斑点。

　　2.2  赤芍

    取参白浓缩丸2 g,研细,加甲醇40 mL超声提取,滤过,滤液回收甲醇并浓缩至干,加2 mL甲醇溶解,得供试品溶液。另取赤芍对照药材用同法制成对照药材溶液。再用同法制成缺赤芍的阴性对照液。分别吸取上述3种溶液及芍药苷对照品溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)作展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,在105 ℃加热至斑点清晰。供试品色谱中,在与芍药苷对照品及对照药材色谱相应的位置上,显相同的蓝紫色斑点,赤芍阴性对照液无上述斑点。   职称论文发表网

　　2.3  白茅根

    取参白浓缩丸2 g,研细,加乙醚20 mL超声提取20 min,滤过,滤液蒸干,残渣冷至室温,加乙醚1 mL使溶解,得供试品溶液。另取白茅根对照药材用同法制成对照药材溶液。再用同法制成缺白茅根的阴性对照液。照薄层色谱法试验,分别吸取上述3种溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-丙酮(10∶1)作展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%的硫酸乙醇溶液,105 ℃加热10 min。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点。
3  丹酚酸B含量测定

　　3.1  对照品溶液的制备

    精密称定丹酚酸B对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液。

　　3.2  供试品溶液的制备

    精密称取本品2 g,研细,加75%甲醇50 mL超声提取(500 W, 40 kHz),滤过,滤液回收甲醇并浓缩至干。残渣加甲醇溶解,转移至10 mL量瓶中,定容,摇匀,得供试品溶液。

　　3.3  阴性对照液的制备

    取除丹参外的其他处方量药材,按制备工艺方法制备丹参阴性对照样品,按“3.2”项下方法制成丹参阴性对照溶液。

　　3.4  色谱条件     职称论文发表网

    色谱柱为Hypersil ODS(4.6 mm×250 mm,5 μm),流速1.0 mL/min,柱温25 ℃,进样量20 μL,检测波长286 nm,流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)。色谱图见图1。

　　3.5  线性关系考察

    精密吸取丹酚酸B对照品溶液5、10、15、20、25、30 μL分别注入高效液相色谱仪,以峰面积为纵坐标,丹酚酸B含量为横坐标绘制标准曲线,得线性回归方程：Y＝638 221X－143 105,相关系数r＝0.999 6,线性范围为2.5～15.0 μg。

　　3.6  精密度试验

    精密吸取对照品溶液20 μL,重复进样5次,测定丹酚酸B峰面积积分值,RSD＝1.74%。

　　3.7  稳定性试验

    分别精密吸取供试品溶液20 μL,于0、6、12、18、24 h进样,测定丹酚酸B峰面积积分值,RSD＝1.70%。

　　3.8  重复性试验

    取同一批样品5份,平行制备5份样品溶液,按样品含量测定方法测定,结果RSD＝1.19%。

　　3.9  加样回收率试验

    精密称取已知含量的供试品,加入一定量的丹酚酸B标准品,按样品含量测定方法测定,结果平均回收率为99.74%,RSD＝2.08%。见表1。表1  丹酚酸B加样回收率试验结果（略）  职称论文发表网
 
　　3.10  样品测定

    取参白浓缩丸5批,按供试品溶液制备方法制备样品溶液,分别进样20 μL,测定丹酚酸B的含量,结果见表2。表2  参白浓缩丸中丹酚酸B含量测定结果(略)

　　4  讨论

    丹酚酸B为本制剂中的主要有效成分,可抑制病毒性心肌炎病毒抗原的表达和病毒的产生[4],对心肌缺血和心律失常具有保护作用[5]。本试验表明,采用HPLC对丹酚酸B的含量测定方法简便、重复性好,因此,确定以丹酚酸B为参白浓缩丸的质量控制指标。
   
　　参白浓缩丸中黄芪、赤芍和白茅根的TLC鉴别试验显示,结果斑点集中,层次清晰,无空白干扰,具有可操作性,可作为参白浓缩丸的定性鉴别方法。