一种新非小细胞肺癌靶向蛋白分子（HER2）的初步研究

杨 秦

邵阳医学高等专科学校，湖南邵阳422000

摘要：目的探讨HER2作为非小细胞肺癌标志物的可能性。方法免疫荧光染色确定HER2表达定位。免疫组化确定其在癌与癌旁组织中的表达强弱。结果在肺癌细胞核和细胞质中都有HER2表达，在癌旁组织中比癌组织有更高HER2蛋白表达。结论HER2蛋白是潜在的非小细胞肺癌标志物。

关键词：非小细胞肺癌；HER2蛋白；癌组织；癌旁组织

中图分类号：R734.2文献标识码：A文章编号：1671-5837(2015)25-0083-01

非小细胞肺癌（NSCLC）大约占到肺癌总量的80-85%[1]，主要包括腺癌、鳞癌、大细胞癌与腺鳞癌，难以在早期诊断与治疗，严重危害人民健康。我国肺癌以每年26.3%的速度增长, 预计到20 25 年我国肺癌人数将达到10 万, 成为世界第一肺癌大国[2]。HER2蛋白是乳腺癌的标志物。肺和乳腺都是上皮起源组织。我们认为在非小细胞肺癌中HER2也具有肿瘤标志物的可能性。

1 材料和试剂

非小细胞肺癌细胞H183来自上海生物中心。非小细胞肺癌组织来自湘雅一医院。培养基等其它材料和试剂均来自生工（生物工程）上海公司。

2 方法

2.1 细胞培养

（1）吸除或倒掉瓶内旧培养液。（2）以25mI培养瓶为例．向瓶内加入1m1消化液轻轻摇动培养瓶，使消化液流通所有细胞表面、然后吸掉或倒掉消化液后再加1—2ml新的消化液、轻轻摇动后再倒掉大部分消化液，仅留少许进行消化。（3）消化最好在37C或室温25C以上环境下进行。消化2—5min后把培养瓶放置显微镜下进行观察．发现胞质回缩、细胞间隙增大，立即终止消化。（4）吸除或倒掉消化液。用胰蛋白酶可直接加少许含血清的培养液终止消化。（5）弯头吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞、平均分配到两个培养皿。

2.2 免疫荧光染色

（1）涂片或切片固定。（2）吸取经适当稀释之免疫血清及补体之等量混合液（此时免疫血清及补体又都稀释一倍）滴于切片上，37℃作用30min，置于保持一定湿度的染色盒内。（3）用缓冲盐水洗2次，搅拌，每次5min，吸干标本周围水液。（4）滴加经过适当稀释之抗补体荧光抗体30min，37℃，水洗同前。（5）蒸馏水洗1min，缓冲甘油封固。

2.3 免疫组化

（1）洗载玻片（2）包埋组织（3）切片（4）捞组织（5）脱蜡（6）抗原修复（7）血清封闭（8）加一抗（9）加二抗（10）加SABC（11）加显色剂（12）复染（13）脱水（14）封片。

3 结果

1     2                 3

图1细胞核图2HER蛋白图3 细胞核和HER蛋白合并。

图4 腺癌中癌旁组织比癌组织的HER2蛋白表达的多

4 讨论

以吉非替尼和厄洛替尼等TKI药物的成功研制和临床应用为代表的靶向药物，以其良好的疗效和较轻的毒副作用，在NSCLC的综合治疗中发挥着越来越重要的作用。尤其对于EGFR基因突变型NSCLC患者，美国NCCN指南及欧洲ESMO指南都已经推荐厄洛替尼作为一线治疗选择。然而，并不是所有NSCLC患者都发生EGFR突变。一些证据表明吉非替尼和厄洛替尼等TKI药物并也非对所有EGFR基因突变的NSCLC患者有效。就算吉非替尼和厄洛替尼等TKI药物治疗是有效，但是患者最终都会出现抗药性[4-5]。NSCLC的靶向治疗为治疗NSCLC提供了新的治疗方案，并在实践中取得了巨大的成功，但仍存在明显的不足。本次研究目的是寻找在NSCLC治疗中更加关键、更加特异的靶点分子，对肿瘤分子生物学特征进行鉴定和分类，解释耐药机制并在此基础上开发、研制新的靶向药物。本次实验发现腺癌中HER2蛋白在癌旁组织相对癌组织中表达更多，而且在细胞核和细胞质都有表达。我们相信它是一种潜在的非小细胞肺癌分子标志物。基于本次研究的结果，接下来可对其临床表达与临床病理分期等进行统计分析。

参考文献

[1]D’Addario G, Fruh M, Reck M, Baumann P, Klepetko W, Felip E.Metastatic non-small-cell lung cancer: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol.2010;21 Suppl 5:v116–9. doi:10.1093/annonc/mdq189.[2]支修益.我国肺癌流行病学现状分析

[3]张贺,娜邵蓉.非小细胞肺癌靶向治疗药物的疗效及经济性研究综述[J]. 药物经济,2013,4:7-10.[4]谭晓红，杨晓*.非小细胞肺癌靶向治疗的临床前研究进展. 生命科学[J]. 2011,4(23) :353-358.课题研究：邵阳医学高等专科学校2014年科研课题（XK201409）