疏肝导浊方干预家兔肝脏脂肪变的实验研究

 现代医学认为，肝脏脂肪变与脂质代谢异常、激素水平改变、环境与遗传因素、脂质过氧化损害、免疫反应、缺氧和肝脏血液循环障碍等原因有关，这些因素均可引发体内脂肪过度增加，在肝细胞中形成脂肪微滴，布散于肝脏中所致[1]。中医认为，机体升清降浊功能失常，“浊”邪在肝脏的过度沉积是脂肪肝的病理基础[2]。本研究探讨疏肝导浊方对家兔实验性肝脂肪变的干预作用，报道如下。

1  实验材料    会计职称论文发表

1.1  动  物 
SPF级家兔42只，体质量2～2.5kg，雌雄不拘，由本院实验动物房提供。

1.2  药  物  疏肝导浊方由柴胡、泽泻、荷叶、丹参、决明子、姜黄、熟首乌组成，由本院第一附属医院中药房提供，经中药化学实验室鉴定为纯正中药。在机能实验室将上述药物按配方比例加10倍量的水煎煮2次，合并滤液，冷凝回流浓缩至含生药1g/ml，置冰箱保存备用。

1.3  仪  器  722型分光光度计、微量移液器、电热恒温水温箱等。

2  实验方法

2.1  分  组  42只家兔随机分为正常组，模型组，疏肝导浊方低、中、高剂量组和饮食治疗组，每组7只。

2.2  造模及干预  正常组以普通饲料喂养，共16周；模型组给予高脂饲料(880g/kg普通饲料+100g/kg猪油+20g/kg胆固醇)喂养12周后处死；疏肝导浊方各组在喂饲高脂饲料12周后改为普通饲料，低剂量组予疏肝导浊方药液1g/kg体质量灌胃，中剂量组给2g/kg体质量灌胃；高剂量组给3g/kg体质量灌胃；正常组12周后按相同的给药体积10ml/kg体质量给予蒸馏水灌胃；均1天1次，早晨9：00给药；灌胃时兔经张口器固定，助手右手压兔头使其向腹侧屈曲，并使兔头维持在屈曲位，操作者持14号导尿管沿张口器中间孔插入15～20cm；饮食治疗组在喂饲高脂饲料12周后改为普通饲料喂养。各组大鼠自由进食、进水，分笼(每笼5只)饲养于20℃±2℃、明暗各12小时的动物实验室内。

2.3  检测指标  于16周末禁食12小时，次日早晨8∶00乙醚麻醉下，心脏采血后处死家兔，迅速取出肝脏，按常规制备肝组织石蜡切片标本，光镜下评估脂肪变性程度和炎症活动度。分离血清测定血清总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白 (HDL?C)、低密度脂蛋白 (LDL?C)、天冬氨酸氨基转移酶（ALT）和丙氨酸氨基转移酶（AST）水平。

2.4  统计学方法  应用SPSS 10.0软件包，计量资料以(±s)表示，采用方差分析，等级资料采用秩和检验。

3  实验结果 

3.1  各组TC、TG、HDL?C、LDL?C、ALT和AST水平比较  与正常组比较，模型组、疏肝导浊方低剂量组、饮食组TC、TG 、HDL?C、LDL?C增高(P<0.05，P<0.01)；与模型组比较，疏肝导浊方低剂量组TC、AST降低(P<0.05);与模型组、饮食组比较，疏肝导浊方中、高剂量组TC、TG、LDL?C、AST下降，HDL?C增高(P<0.01或P<0.05)，见表1。

表1  各组血清TC、TG、HDL?C、LDL?C、ALT、AST水平比较(±s)

组  别剂量/（g/kg）n/只TC/(mg/dl)TG/(mg/dl)HDL?C/(mmol/L)LDL?C/(mmol/L)ALT/(IU/ml)AST/(IU/ml)

正常组757.29±8.3854.62±10.171.46±0.210.45±0.3631.41±3.7735.37±4.11

模型组792.54±10.84**82.89±9.02**2.71±0.36**3.97±1.03**39.98±5.32*47.10±5.02*

低剂量组1779.51±9.13**△71.33±10.87*▲2.66±0.41**2.74±1.12*31.36±6.6739.09±6.33△▲

中剂量组2762.94±7.35△△▲▲57.60±8.07△△▲3.97±0.59**△△▲▲1.02±0.55△△▲▲32.11±3.38△36.15±4.51△▲▲

高剂量组3758.21±7.11△△▲▲56.34±10.29△△▲4.73±0.81**△△▲▲1.13±0.99△△▲▲33.06±5.21△35.99±7.26△▲

饮食治疗组780.87±9.01**△72.71±11.10*2.77±0.51**3.83±0.79**38.34±4.1346.96±4.15*

    与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与饮食治疗组比较，▲P＜0.05,▲▲P＜0.01

3.2  各组肝脏病理学变化比较  光镜下评估肝脂肪变性程度[3]和炎症活动度[4]。与正常组比较，模型组家兔肝脂肪变程度加重，炎症活动度计分增加，差异有统计学意义(P<0.05)；疏肝导浊方中、高剂量组家兔肝脂肪变性程度和炎症活动度计分较模型组降低，疏肝导浊方低剂量组肝脂肪变性程度降低(P<0.05)；各剂量组与正常组肝脂肪变性程度比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；疏肝导浊方低剂量组炎症活动度计分比正常组高(P<0.05)；饮食治疗组肝脂肪变性程度较模型组有所减轻，但两者间差异无统计学意义(P＞0.05)，而其炎症活动度计分较正常组增高(P<0.05)，见表2、3。

4  讨  论 

   
脂肪肝作为一种可逆性病变，早期诊断与合理
表2  各组家兔肝脂肪变性程度比较

组  别n/只-++++++++++P值

正常组741110

模型组701123 *

低剂量组703220△

中剂量组713210△

高剂量组714110△

饮食治疗组701222

   
秩和检验，H=22.376，P=0.000；与正常组比较，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05（下同）

治疗可康复，治疗不及时，部分患者可能发展为肝纤维化、肝硬化[5]。根据中医理论，脂肪肝系肝失条达，肝木乘脾土，运化失常引起气血失调，血瘀脾虚，形成痰湿内困、瘀血阻络，导致脂质沉积于肝[6]。疏肝导浊方用熟首乌补益精血，柴胡疏肝解郁，决明
表3  各组家兔肝组织炎症活动度计分比较

组  别n/只中位数(m)minmaxP值

正常组73.00001.005.00

模型组79.00004.0012.00*

低剂量组78.00004.0011.00*

中剂量组74.00003.008.00△

高剂量组74.00002.008.00△

饮食治疗组78.00005.0012.00*

    秩和检验，H=24.134，P=0.000   会计职称论文发表

子清肝泻浊，丹参活血化瘀通络，配以泽泻、荷叶、姜黄行气疏浊。从实验结果可见，疏肝导浊方可降低高脂血症家兔血清TC、TG，作用机制可能与首乌的有效成分降低或阻止肠内脂质吸收，促进脂质的排泄有关[7]。饮食治疗组除较正常组降低TC外，其余指标与模型组比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，提示单纯改善饮食并不能在肝脂肪变早期有效治疗家兔脂肪肝。

   
结果还显示，疏肝导浊方低剂量组虽可降低TC、TG、ALT和肝脏组织的脂肪变程度，但对脂蛋白（HDL、LDL）、AST和炎症活动度影响无统计学意义，干预效果不理想。中剂量组可明显降低血脂、肝脏脂肪变性程度和炎症反应，保护肝脏，显示具有良好的干预作用。高剂量组降脂作用和对肝组织脂肪变性、炎症反应的控制更明显，但对ALT、AST作用不明显，其是否与调脂药对肝脏的毒性反应有关，如文献报道[8]，首乌具有一定的肝损害危险，尚待进一步研究观察。