必存对重症急性胰腺炎大鼠脑损伤的保护作用

对胰腺炎脑病患者的尸体研究发现其主要病理变化包括血管周围的水肿、局灶性脑梗死区，说明急性胰腺炎脑损伤患者存在缺血性的脑梗死，近年来的实验研究表明，脑梗死是由于脑组织生成过多的羟自由基造成的，必存（3－甲基－1－苯基－2－吡唑啉－5－酮）能有效的清除羟自由基来治疗脑梗死，必存是否对胰腺炎脑损伤引起的脑梗死有治疗作用国内还未见报道。本实验采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠制成大鼠急性胰腺炎模型；从股静脉注入必存，3小时、6小时、12小时后断头取脑，进行脑组织的病理学评分及一氧化氮合酶(iNOS)活性测定，以研究其在急性胰腺炎脑损伤中的作用。

    1  材料与方法

    1.1  试验动物和主要试剂  雄性Sprague－Dawley大鼠，体重280～320g，由苏州大学医学院试验动物中心提供。iNOS测试盒购自南京建成生物技术研究所。

    1.2  动物模型制备和分组  参照杨庆河[1]的方法制备急性胰腺炎(AP)动物模型。制备模型前禁食12小时，自由饮水。4％水合氯醛麻醉后无菌手术，用细针自十二指肠壁逆行穿刺进入胰胆管，缓慢匀速注入牛黄胆酸钠溶液或生理盐水，剂量为0.1mL/100g。5分钟后松开无损伤血管夹，缝合切口，皮下注射生理盐水,自由饮水。教育核心论文发表

    72只大鼠随机分为：(1)对照组：3小时、6小时、12小时各8只，胰胆管内给予生理盐水。（2）坏死组：3小时、6小时、12小时各8只，胰胆管内给予5％牛黄胆酸钠。（3）治疗组：3小时、6小时、12小时各8只，胰胆管内给予5％牛黄胆酸钠后1小时从股静脉注入必存（1mg／100g），对照组及坏死组同时注入等量的生理盐水。

    1.3  标本收集和检测  制模12小时后，4%水合氯醛(10mL/kg)麻醉下腹主动脉穿刺取血后处死大鼠，取血清冻于-70℃冰箱中保存。右侧脑组织在电镜标本取完后于液氮中保存。胰腺和胰周大体病理采用Hughes胰腺大体病理评分法进行评分。左侧大脑半球全部经10％甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜观察。右侧新鲜大脑标本于视神经交叉处作冠状位切片取大鼠脑组织1mm数块,行透射电镜观察。脑组织的镜下病理改变采用孔雷等［2］所做的脑组织病理评分法进行评分，胰腺镜下病理改变采用简化的Schmidt镜下病理评分法进行评分。

    脑组织中的NOSi活性测定，按NOSi试剂盒说明书操作。

    1.4  统计学处理  数据以均数±标准差（x±s）表示，采用SPSS 11.5统计软件对各组数据进行统计学分析。
 2  结果

    2.1  胰腺病理  大体和镜下病理改变分别符合坏死组和对照组改变。大体和镜下病理评分在3小时、6小时和12小时3个时段各组间比较差异有统计学意义（P＜0.01）。

    2.2  脑组织病理检查  治疗组6小时、12小时与治疗组3小时、坏死组比较，差异均有统计学意义。坏死组6小时、12小时与对照组比较，差异有统计学意义。见表1。 表1  脑组织病理评分结果治疗组6小时、12小时与治疗组3小时、坏死组比较，差异均有统计学意义。坏死组6小时、12小时与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表2。表2  脑组织iNOS活性测定结果（U/mg prot）

    3  讨论教育核心论文发表

    对于机体来说，脑组织是代谢最旺盛、耗氧量最高的组织，同时也最易受损伤。由于脑组织含丰富的易受氧化的不饱和脂肪酸，是自由基连锁反应和脂质过氧化作用的底物，同时脑组织抗过氧化的能力相对缺乏。胰腺炎脑损伤时的病理变化包括：多发性的小血管及毛细血管出血、坏死及血管周围水肿，局灶性的梗死，都是脑组织出现缺血、缺氧的表现。而缺血、缺氧则促使脑组织产生过多的自由基，同时这些自由基的清除系统却相对减低。这种过多的自由基可使不饱和脂肪酸过氧化反应增多，产生过多的氧自由基、醇自由基等，使脑组织损伤加重。由此看来，急性胰腺炎脑损伤时自由基至少促进了脑组织损伤的发展，清除脑组织中的自由基对于急性胰腺炎脑损伤具有治疗作用。

    必存能有效地清除脑组织生成过多的自由基，所以有望成为延长脑梗死急性期半暗带时间窗的制剂，抑制脑水肿保护脑组织免受损伤，改善神经功能缺损症状，并对迟发性神经细胞坏死也有抑制作用。其作用机理可能为：清除自由基抑制动脉内皮细胞膜过氧化作用，对细胞膜有保护作用，从而减轻脑水肿；同时抑制细胞膜过氧化作用可减少脑细胞的损害，有利于其稳定[4]。

    本实验研究结果显示：急性胰腺炎制模后3小时脑组织的变化无明显的差别，6小时、12小时治疗组与坏死组比较有统计学意义（P＜0.01），表明必存对于急性胰腺炎脑损伤模型有保护作用，可以减轻急性胰腺炎脑损伤。